چکیده

به منظور ردیابی هیستوموناس مله اگریدیس در بوقلمون‌های کشتار شده در استان اصفهان، 200 نمونه خون و 200 نمونه کبد در کشتارگاه اخذ شد و پس از استخراج DNA، قطعه 550 جفت بازی مربوط به ژن 18SRNA تکثیر شد. علاوه بر آن، نمونه‌های کبد در فرمالین 10% نگهداری و پس از تهیه مقاطع پاتولوژی رنگ آمیزی با هماتوکسیلین - ائوزین از نظر وجود انگل مورد بررسی قرار گرفت. نتایج PCR نشان داد از 200 نمونه خون، 18 نمونه (9%) و از تعداد 200 نمونه کبد، 32 نمونه (16%) از لحاظ هیستوموناس مله اگریدیس مثبت می‌باشد. نتایج هیستوپاتولوژی نشان داد از بین نمونه‌های PCR مثبت 76/11 % در هیستوپاتولوژی مثبت ارزیابی شدند لذا به نظر می‌رسد برای شناسایی هیستوموناس مله اگریدیس PCR از ویژگی بالایی برخوردار می‌باشد.

کلید واژه‌ها : بوقلمون، هیستوموناس مله اگریدیس، PCR، اصفهان.

فهرست مطالب

عنوان                                             صفحه

چکیده 1

فصل اول «مقدمه و طرح تحقیق»

1-1- مقدمه 3

1-2- بیان مسئله 4

1-3- مروری بر سابقه تحقیق 4

1-4- اهداف، فرضیات و سوالات تحقیق 6

1-4-1- اهداف تحقیق 6

1-4-1-1- هدف کلی 6

1-4-1-2- اهداف جزئی 6

1-4-2- فرضیات تحقیق 6

1-4-3- سئوالات تحقيق 6

1-5- روش تحقیق و پژوهش 7

فصل دوم « کلیات »

انگل‌ها و بیماری‌های طیور و سایر پرندگان 9

2-1- انگلهای خارجی 9

2-1-1- ساسها 9

2-1-2- شپشهای گزنده 9

2-1-3- مگسهای سیاه 10

2-1-4- مایت‌های ماکیان 10

2-1-5- لارومایت ها 10

2-1-6- سوسک بستر و لارو آن آلفیتوبیوس دپاپرینوس 11

2-1-7- مایت‌های پر و مایت‌های ایجادکننده پرریزی 11

2-1-8- مایت‌های زیر پوستی 11

2-2- انگل‌های داخلی 12

2-2-1- کیسه ملتحمه 12

2-2-2- نای 13

2-2-4- پیش معده 14

2-2-5- سنگدان 14

2-2-6- روده باریک 15

2-2-7- روده کور 16

2-2-8- پوست 17

2-3- بیماری‌های انگلی طیور 17

2-3-1- کوکسیدیوز 17

2-3-2- کریپتوسپوریدیوز 20

2-3-3- هگزامیتیازیس 24

2-3-4- هیستومونیازیس 27

2-3-5- لکوسیتوزئونوز 32

2-4- واکنش زنجیر‌های پلی مراز( PCR ) 35

2-4-1- مواد و وسایل لازم برای انجام برای انجام آزمایش PCR 36

2-4-2- سنتز 36

2-4-3- تشخیص و تجزیه فراورده‌های PCR: 37

فصل سوم «مواد و روش کار»

3-1- نمونه گیری 40

3-2- استخراج DNA از کبد با استفاده از کیت 40

3-3- استخراج DNA از خون با استفاده از کیت 41

3-4- آزمایش PCR 42

3-4-1- روش کار 42

3-5- تهيه ژل آگارز 43

3-5-1- مواد و وسايل لازم 43

3-5-2- روش تهيه بافر (1X) TBEبراي تهيه ژل آگارز 44

3-5-3- روش تهيه ژل آگارز 44

3-5-4- روش انجام الکتروفورز 44

3-5-5- آنالیز محصول PCR: 45

3-6- آزمایشات هیستوپاتولوژی 45

3-6-1- رنگ آمیزی هماتوکسیلین-ائوزین (H&E) : 45

3-6-2- روش رنگ آمیزی اسلاید با رنگ (H&E) : 46

3-6-3- تفسیر رنگ آمیزی (H&E) 47

3-6-4- نتایج رنگ آمیزی (H&E) 48

فصل چهارم « نتایج »

4-1- نتایج کیفی مربوط به استخراج DNA 50

4-2- نتایج آزمایشات هیستوپاتولوژی 51

فصل پنجم « بحث و نتیجه گیری »

5-1- بحث 53

5-2- پیشنهادات 56

منابع 57

فهرست شکل‌ها

عنوان                                             صفحه

شکل 4-1- الکتروفورز محصولات PCR به منظور تکثیر ژن انگل هیستومونیازیس در نمونه‌های خون و کبد بوقلمون بر روی ژل آگارز 1%. 50

شکل 4-2- مشاهده مقاطع انگل هیستوموناد در بین هپاتوسیت‌های کبدی. 51

فهرست جداول

عنوان                                             صفحه

جدول 4-1- مقایسه روش ردیابی از طریق PCR و آزمایشات هیستوپاتولوژی 51