بخش دوم :مراحل تهیه عصاره گیاهی
2-2-1.تعریف عصاره .................................................................................................................................................................... 16
2-2-2.عصاره گیری....................................................................................................................................................................... 16
2-2-3.روش های عصاره گیری ............................................................................................................................................... 16
2-2-3-1.روش خیساندن............................................................................................................................................................ 16
2-2-3-2.روش پرکولاسیون...................................................................................................................................................... 17
2-2-3-3.انتخاب حلال مناسب.............................................................................................................................................. 18
2-2-3-4.مزایای پرکولاسیون................................................................................................................................................. 19
2-2-3-5.روش خیساندن با حرارت ملایم .......................................................................................................................... 19
2-2-3-6.روش دم کردن ........................................................................................................................................................... 19
2-2-3-7.روش جوشاندن .......................................................................................................................................................... 20
2-2-4.روش های مختلف تغلیظ عصاره ............................................................................................................................... 20
2-2-4-1.تقطیر در خلا............................................................................................................................................................... 20
2-2-4-2.لیو فیلیزاسیون ........................................................................................................................................................... 20
2-2-4-3.حرارت مستقیم ......................................................................................................................................................... 21
بخش سوم :کلیات قارچ شناسی
2-3-1. خصوصیات قارچ ها........................................................................................................................................................ 23
2-3-2.تولید مثل قارچ ها .......................................................................................................................................................... 24
2-3-2-1.تولید مثل غیر جنسی ............................................................................................................................................ 24
2-3-2-2.تولید مثل جنسی ..................................................................................................................................................... 25
2-3-3.ساختمان پیکری قارچ ها ............................................................................................................................................ 25
2-3-4.شرایط لازم رشد قارچ ها ............................................................................................................................................. 26
2-3-5.قارچ های مورد بررسی در این تحقیق .................................................................................................................... 27
2-3-5-1.جنس میکروسپوریوم(Microsporum.......................................................................................................... 27
2-3-5-1-1.میکروسپوروم کانیس (M. canis) ........................................................................................................... 27
2-3-5-1-2.میکروسپوروم جیپسئوم (M .gypseum................................................................................................. 28
2-3-5-2.جنس ترایکوفایتون ( Trichophytom ) .................................................................................................. 29
2-3-5-2-1.ترایکوفایتون منتاگروفایتیس (T.mentagrophaytes )................................................................ 29
2-3-5-2-2.ترایکوفایتون روبروم(T .rubrum) ............................................................................................................ 30
2-3-5-2-3.ترایکوفایتون وروکوزوم(T. vorrocosum,)........................................................................................... 30
2-3-5-3. جنس اپیدرموفایتون (Epidermophyton) ........................................................................................... 31
2-3-5-3-1.اپیدرموفایتون فلوکوزوم((E.floccosum .............................................................................................. 31
2-3-5-4.جنس آسپرژیلوس( Aspergillus) ........................................................................................................... 31
2-3-5-4-1.آسپرژیلوس فومیگاتوس (Aspergillus fumigates)................................................................... 32
2-3-5-4-2.آسپرژیلوس فلاووس (Aspergillus fumigates) ......................................................................... 32
2-3-5-5.کاندیداالبیکنس (Candida albicans....................................................................................................... 32
بخش چهارم: بیماری هایقارچی
2-4-1.اکتساب عفونت‌های قارچ.............................................................................................................................................. 34
2-4-2.انواع بیماری‌های قارچی حاصل ازقارچ های مورد نظر...................................................................................... 34
2-4-2-1.بیماری قارچی گوش خارجی ............................................................................................................................... 35
2-4-2-2.بیماری قارچی جلدی............................................................................................................................................... 36
2-4-2-3.آسپرژیلوزیس .............................................................................................................................................................. 41
2-4-2-3-1.آسپرژیلوزیس آلرژیک.......................................................................................................................................... 42
2-4-2-3-2.آسپرژیلوما یا آسپرژیلوزیس کلنیزه............................................................................................................... 42
2-4-2-3.آسپرژیلوزیس مهاجم................................................................................................................................................ 43
2-4-2-4.کاندیدیازیس................................................................................................................................................................ 43
2-4-2-4-1.عفونت‌های مخاطی.............................................................................................................................................. 44
2-4-2-4-2.بیماری‌های جلدی................................................................................................................................................ 44
2-4-2-4-3.بیماری‌های سیستمیک ..................................................................................................................................... 44
بخش پنجم:روش های بررسی عوامل ضد قارچی
2-5.روش‌های اندازه‌گیری عوامل ضدقارچی........................................................................................................................ 47
2-5-1.عوامل مؤثر بر رشد میکروارگانیسم‌ها...................................................................................................................... 47
2-5-1-1.محیط کشت ............................................................................................................................................................... 47
2-5-2-2.عوامل مؤثر در کشت .............................................................................................................................................. 47
2-5-2-3. مقدار قارچ................................................................................................................................................................... 48
2-5-2-4. دما.................................................................................................................................................................................. 48
2-5-2-5 .اکسیژن......................................................................................................................................................................... 48
2-5-3.ارزیابی ترکیبات ضد قارچی......................................................................................................................................... 49
2-5-3-1.روش رقیق‌سازی.......................................................................................................................................................... 49
2-5-3-1.روش لوله........................................................................................................................................................................ 49
2-5-3-2.روش پلیت با استفاده از محیط جامد................................................................................................................ 49
2-5-3-1-3. روش گرادیانت پلیت.......................................................................................................................................... 50
2-5-3-2.روش کدورت سنجی................................................................................................................................................. 50
2-5-3-3.روش انتشار................................................................................................................................................................... 51
2-5-3-3-1.انتشار عمودی........................................................................................................................................................ 51
2-5-3-3-1.انتشار افقی.............................................................................................................................................................. 51
2-5-4 .عوامل مؤثر در اندازه‌گیری به روش انتشار ......................................................................................................... 54
2-5-4-1.آگار ................................................................................................................................................................................. 54
2-5-4-2. pHآگار و محلول مورد اندازه‌گیری.................................................................................................................. 55
2-5-4-3. شرایط کشت در گرم‌خانه...................................................................................................................................... 56
2-5-4-4. طرز قرار دادن میکروارگانیسم‌هاروی اگار....................................................................................................... 56
2-5-4-5.ماده مورد اندازه‌گیری............................................................................................................................................... 57
2-5-4-6.هاله‌های رشد و عدم رشد ...................................................................................................................................... 57
2-5-5. صحت نتایج حاصل ....................................................................................................................................................... 58
2-5-6. محاسن و معایب روش انتشار ................................................................................................................................... 58
2-5-7.حداقل غلظت مهاری .................................................................................................................................................... 59
2-5-8.روش‌های تعیین MIC ................................................................................................................................................. 59
2-5-9.عوامل مؤثر در تعیین MIC...................................................................................................................................... 59
فصل سوم :مواد و روش ها
بخش اول :کارهای مقدماتی
3-1-1.مواد و وسایل آزمایش ................................................................................................................................................. 63
3-1-2.جمع‌آوری گیاه.................................................................................................................................................................. 64
3-1-3. خشک کردن.................................................................................................................................................................... 64
3-1-4.پودر کردن ........................................................................................................................................................................ 64
3-1-5.پرکولاسیون....................................................................................................................................................................... 64
3-1-6.تغلیظ عصاره‌های تهیه شده توسط دستگاه........................................................................................................... 65
بخش دوم:کشت قارچ
3-2-1.تهیه غلظت‌های مورد نیاز از عصاره گیاه................................................................................................................ 67
3-2-2.تهیه محیط کشت............................................................................................................................................................ 67
3-2-2-1.روش چاهک.................................................................................................................................................................. 67
3-2-2-2.کشت قارچ.................................................................................................................................................................... 68
3-2-2-3.روش اختلاط عصاره و محیط کشت.................................................................................................................... 68
3-2-2-3. روش تهیه سوسپاسیون قارچ و عصاره گیاهی ....................................................................... 68
3-2-4.کنترل + ............................................................................................................................................................................. 68
3-2-5.کنترل – ............................................................................................................................................................................ 68
فصل چهارم:نتایج
1-4.مشاهد پلیت ها بعد از کشت قارچ ها........................................................................................................................... 70
فصل پنجم :بحث و نتیجه گیری
1-5.بحث و نتیجه گیری.............................................................................................................................................................. 73
2-5.پیشنهادها ............................................................................................................................................................................... 74
خلاصه انگلیسی .......................................................................................................................................................................... 75
فهرست منابع................................................................................................................................................................................. 76
ضمائم.................................................................................................................................................................................................. 80
فهرست جداول
عنوان صفحه
جدول3-1 مواد بکار رفته در تحقیق ...................................................................................................................................... 63
جدول3-2دستگاه های مورد استفاده .................................................................................................................................... 63
جدول1-4 بررسی رشد قارچ ها ............................................................................................................................................... 70