چکیده

استافیلوکوکوس اورئوس به عنوان سومین عامل مهم بیماری های با منشاء مواد غذایی مطرح می باشد. شیر ماده ای اولیه منا سب  جهت رشد استافیلوکوکوس اورئوس بوده و فراورده های شیری منبع شناخته شده ای برای مسمومیت های استافیلوکوکی است.

این مطالعه جهت تعیین میزان شیوع استافیلوکوکوس اورئوس در پنیرهای محلی انجام شده است. مجموعا 103  نمونه بطور تصادفی از روستاهای اطراف ملکان و میاندوآب  جمع آوری و با روش ها  کشت و  PCR مورد آزمایش قرار گرفتند.

براساس نتایج این مطالعه 7 مورد (6/11 درصد) از نمونه ها آلوده به استافیلوکوکوس اورئوس  بودند و 7مورد دیگر(6/11درصد) از نمونه ها آلوده به استافیلوکوکوس اینترمدیوس بودند وبراساس نتایج بدست امده در این مطالعه 2 /23 درصد  از نمونه ها استافیلوکوکوسهای کواگولاز مثبت آلوده بودند و8/76 درصد  از نمونه ها به استافیلوکوکوسهای کواگولاز منفی آلوده بودند.

نتایج این تحقیق نشان داد که  رعایت شرایط بهداشتی در حین تولید الزامی است و استفاده از شیر پاستوریزه در تهیه پنیر دارای اهمیت می باشد.

کلمات کلیدی: پنیر محلی – استافیلوکوکوس اورئوس- کشت –  PCR - ملکان و میاندوآب.

فهرست مطالب:

چکیده. ......................................... .1

فصل اول: مروری بر پیشینه ی  تحقیق

مقدمه. ......................................... . 2

اهداف تحقیق..................................... .3

جنس ا ستافیلوکوکوس.............................. .5

 طبقه‌بندی استافیلوکوکوس ا ورئوس................. .5

استافیلوکوکوس اورئوس............................ 7

مورفولوژی....................................... .7

ویژگی‌های ساختمانی. ............................. .7

ویژگی های بیولوژیکی و بیوشیمیایی................ ..8 پتیدوگلیگان................................................ 9

پلی سارکارید.................................... .10

اسیدتیکوئیک..................................... . 10

پروتئین. A....................................... 11

فیزلوژی......................................... .11

خصوصیات کشت .................................... ..11

متابولیسم....................................... .12

شناسایی بیوشیمیایی.............................. . 13

روش های طبقه بندی............................... . 13

تعیین تیپ با باکتریوفاژ......................... .13

تعیین انواع .................................... . 14

ژنتیک........................................... .14

مقاومت.......................................... .15

عوامل موثر در بیماریزایی........................ . 15

گیرنده های پروتئینی............................. .16

آنزیم های خارج سلولی............................ .16

گوآکولاز......................................... 17

فاکتور کلامپینگ.................................. 17

علت پلی مورفیسم کوآگولاز......................... .18

لیپازها......................................... .18

هیالورونیداز.................................... .18

استافیلوکیناز (فیبرینولیزین) ................... 19

نوکلئاز مقاوم به حرارت.......................... .19

توکسین های سیتولیتیک............................ .19

توکسین آلفا (همولیزین-آلفا ).................... .19

توکسین بتا (اسفنگومیلیناز)...................... .19

توکسین دلتا..................................... .19

توکسین گاما..................................... .20

لکوسیدین........................................ .20

توکسین ها ...................................... 21

پایداری انتروتوکسین ها در برابر حرارت........... ..22

تولید انتروتوکسین............................... . 23

توکسین اکسفولیاتیو.............................. .23

بیماریزایی خارج روده ای......................... .23

مسمومیت غذایی استافیلوکوکوس..................... 20

علایم مسمومیت غذایی.............................. .25

فصل دوم: روش تحقیق

مواد و روش کار.................................. ..27

محیط های کشت ...................................  27

محیط غنی کننده.................................. . 27

محیط انتخابی.................................... .28

تست های تاییدی. ................................ ..30

تست کاتالاز...................................... .30

تست گلوکز....................................... .30

تست مانیتول..................................... .30

تست کوآگولاز..................................... .31

مشاهده میکروسکوپی............................... .32

نحوه نمونه برداری............................... .32

آماده کردن نمونه جهت انجام آزمایش. ............. .32

استخراج DNA..................................... .33

تعیین کیفیت  DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز   . 34

 تعیین کمیت و کیفیت  DNA با استفاده از اسپکتروفتومتری    34

واکنش زنجیره ای پلی مرازی....................... 35  

الکتروفورز فرآورده های PCR  ..................... 36

تفکیک قطعات تکثیریافته. ........................ . 37

بارگذاری محصولات تکثیر شده....................... ..37

فصل سوم:نتایج تحقیق

نتایج شناسایی استافیلوکوکوس اورئوس با کشت....... ..32

نتایج تعیین کیفیت DNA با استفاده از الکتروفورز بر روی ژل آگاروز ................................................ 41

نتایج انجام واکنش زنجیره ای پلی مراز براساس ژن Coa   . 42

نتایج تعیین توالی............................... ..43

فصل چهارم:بحث و نتیجه گیری

نتیجه گیری وپیشنهاد............................. . 51

فهرست منابع..................................... 95

چکیده انگلیسی................................... .98

جدول 1-1- اسامی گونه های شناسایی شده استافیلوکوکوس   .6

جدول 2-1- خصوصیات بیوشیمیایی استافیلوکوکوس اورئوس در مقایسه باسایر.......................................... .. 9

جدول 3-1- صفات متمایز کننده و تشخیص استافیلوکوکوس و میکروکوکوس................................................ . 9

جدول 1-2-ترکیب ومقدار مواد تشکیل دهنده ی محیط  کشت گوشت پخته نمک دار............................................. 27

جدول2-2- ترکیب ومقدار مواد تشکیل دهنده ی محیط  کشت برد پارکر آگار............................................ 29

جدول 3-2- غلظت مواد تشکیل دهنده  لیز بافر         34

جدول 4-2-اجزای واکنش زنجیره ای پلی مراز.......... .36

جدول 5-2-پرایمرهای مورد استفاده.................. .36

جدول 6-2- نحوه تهیه یک بافر TAE 50 X.............. 37

جدول 7-2- بافر لودینگ 6X ........................ 37

جدول 8-2- محلول های مورد نیاز برای الکتروفورز ژل آگاروز  39

جدول 1-3- توزیع فراوا نی و درصدی نمونه های مورد آزمایش   39

جدول 2-3-توزیع فراوانی نتایج کشت برحسب نوع شیر در 103 نمونه مورد آزمایش.......................................... 40

جدول 3-3- آلودگی نمونه ها برحسب سن پنیر در 103 نمونه مورد مطالعه................................................ 40

جدول 4-3- آلودگی نمونه ها برحسب نوع پنیر در 103 نمونه مورد مطالعه.......................................... 40

جدول 5-3- نتایج نهایی نمونه های پنیر مورد بررسی از نظر رشد باکتری در 103 نمونه موردمطالعه................... 41

تصویر-1-1- تشکیل پرگنه های سیاه در محیط کشت برد پارکر آگار   56

تصویر3-1- الکتروفورز DNA  های استخراج شده........ 59

تصویر3-2- الکتروفورز محصول PCR  ژن coa در آگاروز 5/1 درصد  60